光學(xué)顯微鏡試樣的制作方法主要包括以下步驟:
試樣選擇:選擇具有代表性的、能反映組織或物體特征的樣本。
試樣處理:將試樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)那懈睢⒋蚰?、拋光等處理,以便更好地觀察其表面和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
固定:根據(jù)試樣的種類和觀察目的選擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?,如乙醇。將處理好的試樣放入固定液中,保持一定時(shí)間,使組織或細(xì)胞固定在一定位置,防止在后續(xù)處理過程中發(fā)生移動(dòng)或變形。
脫水:選擇適當(dāng)?shù)拿撍畡缫掖?、丙酮等,以逐步去除試樣中的水分。將固定好的試樣放入脫水劑中,逐步提高脫水劑的濃度,直?/span>去除試樣中的水分。
包埋:選擇適當(dāng)?shù)陌駝?,如石蠟、樹脂等,以保護(hù)試樣并使其具有一定的硬度。將脫水好的試樣放入包埋劑中,進(jìn)行加熱或加壓處理,使包埋劑充分滲透到試樣中并填充組織間的空隙。
完成上述步驟后,就可以進(jìn)行切片了。光學(xué)顯微鏡的切片厚度通常在2~25微米之間,具體切片厚度根據(jù)試樣的種類和觀察目的確定。常用的切片法包括石蠟切片法、棉膠切片法、冰凍切片法等。以石蠟切片法為例,操作過程為:固定→水洗→從低濃度逐級(jí)到高濃度酒精脫水→二甲苯透明→浸蠟→包埋→切片→貼片→二甲苯脫蠟→逐級(jí)從高濃度到低濃度酒精處理,最后過渡到水→染色→逐級(jí)從低濃度到高濃度酒精脫水→二甲苯透明→樹脂膠封固。
完成切片后,就可以將玻片放在光學(xué)顯微鏡的載物臺(tái)上進(jìn)行觀察了。首先,需要打開光源開關(guān),調(diào)節(jié)光強(qiáng)到適宜大小。然后,轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器,使低倍鏡頭正對載物臺(tái)上的通光孔,調(diào)節(jié)鏡頭與載物臺(tái)的距離,使視野內(nèi)呈現(xiàn)明亮的狀態(tài)。接著,將玻片放在載物臺(tái)上,使被視察的部分位于通光孔的正中心,并用標(biāo)本夾夾好。先用低倍鏡視察,調(diào)節(jié)焦距使物像清晰。如果需要,可以漸漸調(diào)節(jié)載物臺(tái)移動(dòng)手柄,使物像位于視野中心。
這就是光學(xué)顯微鏡試樣制作和觀察的基本方法。請注意,不同的試樣可能需要不同的處理方法和觀察技巧,因此在實(shí)際操作中,建議根據(jù)具體的試樣類型和觀察目的進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。同時(shí),為了保障安全和準(zhǔn)確性,建議在專業(yè)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行操作。