倒置熒光顯微鏡，是指與一般顯微鏡相比，其物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來，由熒光附件與顯微鏡有機結合構成的顯微鏡。激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面，被反射到物鏡中并聚集在樣品上，樣品所產生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡，經雙色束分離器使激發(fā)光和熒光分開而成像。物鏡和聚光鏡的工作距離很長，能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進行顯微觀察和研究。

 

倒置熒光顯微鏡使用時可能需要的問題有哪些？

 

1、正確觀察白光的步驟？

 

將標本置于載物臺上，打開電源開關；將轉盤聚光器調整到明視場，然后將環(huán)狀光闌調整到z大光圈；從低倍鏡開始觀察。

 

2、相差環(huán)中BF/PHL/PH2等這些字母到底是什么意思？

 

倒置熒光顯微鏡本身是結合了熒光附件和相差顯微鏡的特點。那么在相差環(huán)中的這些字母分別代表了：PHL(4×0.13)、PH1(20×0.45)、PH2(40×0.6)、BF代表的是白光。所以如果我們觀察的是熒光，前三種相差是都可以選擇的。所謂的相差可以理解成是對于透明結構的放大處理，因為細胞本身內部結構是透明的，我們想觀察細胞內部結構的時候就需要使用相差。

 

3、無論怎么調整細準焦螺旋，鏡下的圖像都不清楚？

 

這種情況下很可能是鏡頭不干凈，可以用酒精棉擦拭一下鏡面。另外高倍數的物鏡鏡頭外也有一個旋鈕，適當旋轉這個旋鈕也會使畫面變得清晰。

 

4、正確觀察熒光的步驟？

 

關閉室內的燈光，打開白光電源和汞燈電源，一般汞燈需要提前打開10分鐘預熱才能達到zui亮；關閉熒光shutter，用低倍鏡找到細胞位置；關閉透射光按鈕，打開熒光光路shutter，旋轉熒光濾色轉盤；電腦顯示器中觀察。

熒光光路shutter要zui后打開，zui先關閉，這樣可以保護樣本，避免過度的熒光猝滅。

 

5、如何維護汞燈？

 

汞燈在工作時會散發(fā)出較大的熱量，因此要保持室內溫度不要過高，具有良好的散熱環(huán)境。一個汞燈的工作壽命一般是200個小時，但并不是使用時間越短，觀察的越快，越能延長汞燈的壽命。相反的，如果工作時間越短，反而會讓汞燈壽命減少的越快，所以要盡量減少開關的次數。

 

6、為什么目鏡下觀察到的圖像只有一半兒？

 

出現這種情況的原因一般是CT環(huán)調整出現了問題。CT環(huán)位于目鏡下方，也叫合軸調中目鏡，有CT/O/S三個參數設置。CT對應的是光路對準了望遠鏡；O對應的是光路中沒有物體；S對應的是光路中有遮光板。那么上述情況就是CT環(huán)這個螺旋位于CT和S兩個參數之間。